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鱼ELISA试剂盒样品采集及血清分离中要注意避免细菌污染

点击次数:260 发布时间:2018-08-28

鱼ELISA试剂盒样品收集和保存:
用于ELISA测定最常用的临床标本是血清(浆)。要注意避免严重溶血,因为血红蛋白中含有具有类似过氧化物活性的血红素基团,在孵育时很容易吸附于固相,与HRP底物反应产生假阳性。
鱼ELISA试剂盒样品采集及血清分离中要注意避免细菌污染,一方面细菌分泌的酶可能对抗原抗体等蛋白产生分解作用,另一方面,细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶会对相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。
鱼ELISA试剂盒样品应该要避免反复冻融。因反复冻融所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。另外,样品混匀时,不要剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。
一般而言,如果在收集样品的当天进行检测,可将样品及时储存在4℃备用;而对隔天再检测的样本,应及时分装后冻存在-20℃备用,若要长期保存样品,最好将其置于-70℃冻存。
实验具体步骤:
1、鱼ELISA试剂盒试剂准备
在实验开始前,需将试剂盒从冰箱中拿出来在室温放置20min,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡,也可使温育时反应孔内的温度能较快的达到所要求的高度,以满足测定要求。
其次,目前商品中ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验过程中对其所提供的浓缩液进行稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应该保证质量。此外,底物反应液应该反应显色前进行现配现用。同时,为了保证实验的均一性,实验中所有试剂在加样前必须摇匀。
2、鱼ELISA试剂盒加样
因ELISA的灵敏度较高,则应该按规定将血清稀释至适当的倍数,以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。
加样品时,单孔用量要求:≥20ul/指标,如需要做2个复孔则血量≥60ul/指标。如果用量充足,最好提供50ul/孔/指标。具体用量也需根据试剂盒的要求而定。
吸取样品时,加样枪头不应粘附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体,否则会导致液体残留在吸头上,加样不准确。正确加样方法应为45度,吸头贴着孔壁和液面的交界处加入。
加样时速度不可过快,否则无法保证微量加样的准确性和均一性;要避免样品加在孔壁上部而产生非特异性吸附。不可将样品溅出以避免对邻近孔产生污染。 

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